技術(shù)文章
葉綠素含量的測(cè)定
2013-10-16
原理根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收,利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度,即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常數(shù)。
一、原理
根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收,利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度,即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位,液層厚度為1cm時(shí),α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)可通過(guò)測(cè)定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì),則此混合液在某一波長(zhǎng)下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。今欲測(cè)定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量,只需測(cè)定該提取液在三個(gè)特定波長(zhǎng)下的吸光度A,并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測(cè)定葉綠素a、b時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾,所用單色光的波長(zhǎng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的*大吸收峰。
二、材料、儀器設(shè)備及試劑
(一)材料:新鮮(或烘干)的植物葉片。
(二)儀器設(shè)備:1. 分光光度計(jì);2. 電子頂載天平(感量0.01g);3. 研缽;4. 棕色容量瓶;5. 小漏斗;6. 定量濾紙;7. 吸水紙;8. 擦境紙;9. 滴管。
(三)試劑:96%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸鈣粉。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,剪碎(去掉中脈),混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,共3份,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3ml95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10ml,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。3. 取濾紙1張,置漏斗中,用乙醇濕潤(rùn),沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過(guò)濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次,*后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?. 用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。*后用乙醇定容至25ml,搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95%乙醇為空白,在波長(zhǎng)665nm、649nm下測(cè)定吸光度。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算:將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子:Ca=13.95A665-6.88A649;Cb=24.96A649-7.32A665。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度(Ca、Cb:mg/L),二者之和為總?cè)~綠素的濃度。*后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量:
葉綠素的含量(mg/g)= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重(或干重)。
根據(jù)葉綠體色素提取液對(duì)可見光譜的吸收,利用分光光度計(jì)在某一特定波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度,即可用公式計(jì)算出提取液中各色素的含量。根據(jù)朗伯—比爾定律,某有色溶液的吸光度A與其中溶質(zhì)濃度C和液層厚度L成正比,即A=αCL式中:α比例常數(shù)。當(dāng)溶液濃度以百分濃度為單位,液層厚度為1cm時(shí),α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)可通過(guò)測(cè)定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長(zhǎng)下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì),則此混合液在某一波長(zhǎng)下的總吸光度等于各組分在相應(yīng)波長(zhǎng)下吸光度的總和。這就是吸光度的加和性。今欲測(cè)定葉綠體色素混合提取液中葉綠素a、b和類胡蘿卜素的含量,只需測(cè)定該提取液在三個(gè)特定波長(zhǎng)下的吸光度A,并根據(jù)葉綠素a、b及類胡蘿卜素在該波長(zhǎng)下的吸光系數(shù)即可求出其濃度。在測(cè)定葉綠素a、b時(shí)為了排除類胡蘿卜素的干擾,所用單色光的波長(zhǎng)選擇葉綠素在紅光區(qū)的*大吸收峰。
二、材料、儀器設(shè)備及試劑
(一)材料:新鮮(或烘干)的植物葉片。
(二)儀器設(shè)備:1. 分光光度計(jì);2. 電子頂載天平(感量0.01g);3. 研缽;4. 棕色容量瓶;5. 小漏斗;6. 定量濾紙;7. 吸水紙;8. 擦境紙;9. 滴管。
(三)試劑:96%乙醇(或80%丙酮);石英砂;碳酸鈣粉。
三、實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取新鮮植物葉片(或其它綠色組織)或干材料,擦凈組織表面污物,剪碎(去掉中脈),混勻。2. 稱取剪碎的新鮮樣品0.2g,共3份,分別放入研缽中,加少量石英砂和碳酸鈣粉及2~3ml95%乙醇,研成均漿,再加乙醇10ml,繼續(xù)研磨至組織變白。靜置3~5min。3. 取濾紙1張,置漏斗中,用乙醇濕潤(rùn),沿玻棒把提取液倒入漏斗中,過(guò)濾到25ml棕色容量瓶中,用少量乙醇沖洗研缽、研棒及殘?jiān)鼣?shù)次,*后連同殘?jiān)黄鸬谷肼┒分小?. 用滴管吸取乙醇,將濾紙上的葉綠體色素全部洗入容量瓶中。直至濾紙和殘?jiān)袩o(wú)綠色為止。*后用乙醇定容至25ml,搖勻。5. 把葉綠體色素提取液倒入光徑1cm的比色杯內(nèi)。以95%乙醇為空白,在波長(zhǎng)665nm、649nm下測(cè)定吸光度。
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算:將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子:Ca=13.95A665-6.88A649;Cb=24.96A649-7.32A665。據(jù)此即可得到葉綠素a和葉綠素b的濃度(Ca、Cb:mg/L),二者之和為總?cè)~綠素的濃度。*后根據(jù)下式可進(jìn)一步求出植物組織中葉綠素的含量:
葉綠素的含量(mg/g)= [葉綠素的濃度×提取液體積×稀釋倍數(shù)]/樣品鮮重(或干重)。